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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠棕色脂肪分離自棕色脂肪組織；動(dòng)物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪，白色脂肪堆積在皮下，負(fù)責(zé)儲(chǔ)存多余熱量；棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量，本身不儲(chǔ)存熱量。棕色脂肪組織呈棕色，其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管，脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴，線粒體大而豐富，核圓形，位于細(xì)胞中央，這種脂肪細(xì)胞也稱(chēng)為多泡脂肪細(xì)胞。棕色脂肪組織在成年動(dòng)物極少，新生兒及冬眠動(dòng)物較多，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時(shí)期發(fā)揮作用，它們堆積在新生兒肩胛處，幫助維持體溫。隨著年齡增長(zhǎng)，棕色脂肪會(huì)逐漸消失。終，動(dòng)物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞，分布于頸部和鎖骨。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色（棕色）脂肪細(xì)胞，常呈白色，在嬰幼兒期大量增殖，到青春期數(shù)量達(dá)到，此后數(shù)量一般不再增加。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡，稱(chēng)為脂質(zhì)泡，富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。此外，還有一種褐色脂肪細(xì)胞，在動(dòng)物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間、頸背部、腋窩、縱隔及腎臟周?chē)懈叨葓F(tuán)縮的褐色脂肪，作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱，調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠棕色脂肪采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠棕色脂肪經(jīng)油紅O染色檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠0酸烯醇式酸羧激酶1(PCK1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： PCK1 ELISA Kit

Mouse hepatitis B virus e aibody (HBeAb) ELISA Kit 小鼠乙型肝e抗體(HBeAb)檢測(cè)試劑盒

RatHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGCELISAKit大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素

細(xì)胞S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

NP重組甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) Protein

PDGF-R-A 血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A(抗原 0.5mgPDGF-R-A 血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A(抗原)

CEACAM8重組人 CEACAM8 / CD66b 蛋白 Protein

FAM171B Protein Human 重組人 FAM171B / KIAA1946 蛋白

CD14 Protein Human 重組人 CD14 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PDGF-R-A 血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A(抗原 0.5mgPDGF-R-A 血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A(抗原)

FAM171B Protein Human 重組人 FAM171B / KIAA1946 蛋白

NP重組甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) Protein

CD14 Protein Human 重組人 CD14 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CEACAM8重組人 CEACAM8 / CD66b 蛋白 Protein

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human growth regulated oncogene alpha / melanoma growth stimulating factor (GRO alpha/CXCL 人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL

Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit 人酸脫輕酶E1(PDHE1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-Qfeveraibody,ai-Q-Ab檢測(cè)試劑盒人抗Q熱抗體(ai-Q-Ab)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物釋放凋亡檢測(cè)試劑盒(含抗體)10次

Humaumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit人壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠棕色脂肪細(xì)胞小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠P物質(zhì)(SP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠P53(P53-ab)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠p53(p53)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。