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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠前列腺平滑肌細(xì)胞

英文名稱：Mouse Prostate Smooth Muscle Cells

組織來源：前列腺

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠前列腺平滑肌分離自前列腺組織；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官；前列腺是不成對(duì)的實(shí)質(zhì)性器宮，由腺組織和肌組織構(gòu)成。前列腺如栗子，底朝上，與膀胱相貼，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面貼恥骨聯(lián)合，后面依直腸。前列腺腺體的中間有尿道穿過，扼守著尿道上口，所以，前列腺有問題時(shí)，排尿先受影響。前列腺是機(jī)體非常少有的，具有內(nèi)、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液，是構(gòu)成精液主要成分；作為內(nèi)分泌腺，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素"。前列腺平滑肌細(xì)胞是前列腺的重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。前列腺平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠前列腺平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠前列腺平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。

大鼠神經(jīng)介素B(NMB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： NMB ELISA Kit

Mouse plasmin aiplasmin complex (PAP) ELISA Kit 小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)檢測(cè)試劑盒

RatAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit 大鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHBcAb(Humanai-hepatitisBviruscoreaibody)ELISAKit人抗乙型肝病毒核心抗體

細(xì)胞半胱蛋白酶-2(CASPASE-2)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

RatVitaminE,VEELISAKit大鼠(VE)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

TNFRSF19重組小鼠 TNFRSF19 / TROY 蛋白 Protein

Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽 0.5mgCaspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽)

RSPO2重組人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 標(biāo)簽) Protein

CXCL9 Protein Human 重組人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

IL7R Protein Rat 重組大鼠 IL7R / IL7RA 蛋白

Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽 0.5mgCaspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽)

CXCL9 Protein Human 重組人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

TNFRSF19重組小鼠 TNFRSF19 / TROY 蛋白 Protein

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RSPO2重組人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA 試劑盒 96T/48T

The rat cellar protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)檢測(cè)試劑盒

HumanElastinELISAKit 人彈性蛋白(Elastin)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanadaptormoleculeapoptoticpeptidaseactivatingfactor1,APAF1檢測(cè)試劑盒人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

脂質(zhì)過氧化物異構(gòu)前列腺素(ISOPROSTANE)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒20次

MouseAmylinELISAKit小鼠胰淀素(Amylin)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠前列腺平滑肌細(xì)胞小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠結(jié)蛋白(Des)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠結(jié)腸癌抗原(CCA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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