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細胞簡介：

人乳腺上皮分離自乳腺組織；乳腺是復管泡狀皮膚腺，主要由腺上皮細胞組成，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期，導管末梢發(fā)育成腺泡；近年來的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細胞（MEC）有密切聯(lián)系，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關鍵步驟。乳腺是乳房的腺體組織，乳腺由導管和腺泡組成，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長因子共同調(diào)控，其中乳腺表達的生長因子對乳腺上皮細胞的增殖、分化、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮分離自分娩后3-5天的乳腺組織，為貼壁生長型細胞，呈多角形、圓形以及短梭形；乳腺上皮細胞主要功能即生乳功能。

方法簡介：

公司實驗室分離的人乳腺上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人乳腺上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子免疫球蛋白M(IgM)試劑盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白G(IgG)試劑盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白E(IgE)試劑盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白A(IgA)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat heat shock protein 96 (HSP gp96) ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)試劑盒

Humaniegrin-linkedkinase1,ILK-1ELISAKit 人整合素連接激酶1(ILK-1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCalreticulin,C試劑盒人鈣網(wǎng)蛋白(C)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組逆轉錄病毒穩(wěn)態(tài)表達細胞克隆凍存試劑盒50次

Humansolubleierleukin-1receptorⅡ，IL-1sRⅡELISAKit人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)試劑盒規(guī)格：96T/48T

GFP重組水母 GFP 蛋白 Protein

TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 0.5mgTRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand) 壞死因子相關凋亡誘導配體/凋亡素2配體抗原

AMICA1重組人 JAML / AMICA 蛋白 Protein

GFER Protein Human 重組人 GFER / ALR 蛋白

IL32 Protein Human 重組人 Interleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 標簽)

PLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase 0.5mgPLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase) 型纖溶酶原激活因子(多肽)

GFER Protein Human 重組人 GFER / ALR 蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FGF1 Protein Human 重組人 aFGF / FGF1 蛋白

CDK1重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標簽) Protein

人乳腺上皮細胞大鼠糖原0酸化酶B(PYGB)試劑盒 ，英文名： PYGB ELISA Kit

Mouse carbonic anhydrase (CA) ELISA Kit 小鼠酶(CA)試劑盒

RatAndrostenedione,ASDELISAKit 大鼠雄(ASD)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHNP1-3(Humanneuophilpeptide1-3)ELISAKit人中性粒細胞防御素1-3

細胞PKCζ激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitFlt3L大鼠FMS樣酪激酶3配體

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。