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IRF1 ELISA定量試劑盒效果不佳的原因是什么？

點(diǎn)擊次數(shù)：1455 更新時(shí)間：2018-12-27

　　IRF1 ELISA定量試劑盒效果不佳的原因是什么？

　　在使用IRF1 ELISA定量試劑盒做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，有些細(xì)節(jié)若是做不好會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)異常，或者效果不佳，那么你有想過是什么原因嗎？

　　一·白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對(duì)照不顯色。

　　這可能是因?yàn)椋?/div>

　　1. 試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用（解決方式：檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用）。

　　2. 錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B（解決方式：嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象）。

　　3. 洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力（解決方式：確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈）。

　　4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配制（解決方式：每次配制時(shí)都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì)）。

　　5. 蒸餾水有問題（解決方式：確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未污染，與好蒸餾水比較）。

　　二·顯色弱、靈敏度低：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，包括陽性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。

　　這可能是因?yàn)椋涸噭┖谐^期，超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)；試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響（實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)試劑未過期。不要將試劑盒長(zhǎng)時(shí)間置于常溫下，按使用規(guī)定儲(chǔ)藏）。

　　1. 試劑、樣品用前未平衡至室溫。如何解決？從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡 20分鐘左右。

　　2. 加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計(jì)量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。如何解決？確定所使用的試劑體積正確，加入時(shí)間適當(dāng)。校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應(yīng)*。

　　3. IRF1 ELISA定量試劑盒洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力。如何解決？確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈，確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染。

　　4. 孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)整。如何解決？孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。

　　5. 洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時(shí)間太長(zhǎng)。如何解決？嚴(yán)格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時(shí)間和洗滌次數(shù)。

　　6. 顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。如何解決？顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入

　　7. 底物作用時(shí)間不夠。如何解決？準(zhǔn)確定時(shí)。

　　8. 蒸餾水水質(zhì)有問題。如何解決？測(cè)定蒸餾水配制試劑對(duì)酶免疫法的影響。

　　三·IRF1 ELISA定量試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，陰陽性對(duì)照正常，質(zhì)控正常，但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱

　　1. 待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的（解決方式：如有懷疑，可復(fù)檢）。

　　2. 標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑（解決方式：酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑）。

　　四·陰陽性對(duì)照正常，但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽性標(biāo)本未能檢出。

　　1. 未達(dá)要求的孵育溫度及孵育時(shí)間可檢出強(qiáng)陽性標(biāo)本，但質(zhì)控或弱陽性標(biāo)本受溫度變化影響較大而被未檢出（解決方式：質(zhì)控品或標(biāo)本避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的，可存于 2-8℃，如需保存，應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝，并置于-20℃以下保存）。

　　2. 質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過久，或被反復(fù)凍融致待測(cè)物滴度下降，而未能檢出（解決方式：重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配）。

　　3. IRF1 ELISA定量試劑盒儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配（解決方式：重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配）。

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